Funktionelle Charakterisierung einer Matrix Metalloproteinase aus Tomate
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Funktionelle Charakterisierung einer Matrix Metalloproteinase aus Tomate

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Matrix Metalloproteinasen (MMPs) steuern in zoologischen Systemen zahlreiche physiologische Prozesse, wie Embryogenese, Organogenese, Wundheilung, Zellteilung und – differenzierung. Ihre Fehlregulation fuhrt zur Entstehung bedeutender Krankheiten wie z.B. Arteriosklerose und Krebs. In Pflanzen hingegen ist die Funktion der Enzyme erst ansatzweise verstanden bzw. in Tomatenpflanzen noch ungeklart. Die biochemischen Eigenschaften der MMP1 aus Tomate (SlMMP1) wie auch der jungst identifizierten SlMMP2 sind bekannt und deuten auf eine redundante Funktion der beiden Proteine in vivo hin. Die Aufklarung dieser Funktion stand im Mittelpunkt der vorliegenden Arbeit. Fur SlMMP1 und 2 wird die Verankerung in der Plasmamembran uber einen Glycosylphosphatidylinositol- (GPI-) Anker prognostiziert. In SlMMP1 uberexprimierenden Zellkulturen und transgenen Pflanzen konnte eine Assoziation mit Membranpraparationen bestatigt werden. Fur ein SlMMP1-GFP-Fusionsprotein wurde die Lokalisation in der Plasmamembran gezeigt. Die GPI-Verankerung konnte nicht zweifelsfrei nachgewiesen werden, jedoch wurde eine fur diese Verankerung typische Abspaltung von der Membran („shedding“) beobachtet. Wesentlich fur die physiologische Aufgabe sind die Substrate von Proteasen. Im Rahmen dieser Arbeit konnte eines der in vivo-Substrate von SlMMP1/2 identifiziert werden. Dabei handelt es sich um die extrazellulare Subtilase P69B aus Tomate, die von beiden MMPs in vitro gespalten wird. In transgenen Pflanzen, die die MMPs aufgrund von RNA-Interferenz nicht exprimieren (RNAi-Pflanzen), kommt es zu einer massiven Akkumulation von P69B. Die RNAi-Pflanzen zeigen einen auffalligen Phanotyp, welcher sich in nekrotischen Lasionen v.a. an Hypokotylen außert, doch konnen Zelltodereignisse daruber hinaus auch im Rest der Pflanzen beobachtet werden. Die transiente Expression von P69B in Blattern von Tomaten- und Tabakpflanzen bestatigte die Beteiligung der Subtilase am kontrollierten Zelltod. Die Beobachtungen deuten darauf hin, dass SlMMP1 und 2 indirekt uber die Spaltung von P69B eine Kontrolle uber den Zelltod ausuben. Dies steht auch im Einklang mit der fur P69B beschriebenen Rolle in der Pathogenabwehr. Bestatigung fanden diese Befunde durch die Analyse der Proteome von Wildtyp- und MMPRNAi- Pflanzen uber 2D-DIGE. In RNAi-Pflanzen konnte die Anreicherung von P69B nachgewiesen werden. Daruber hinaus erwiesen sich zahlreiche an der Stressantwort beteiligte Proteine als signifikant hochreguliert. Hierbei handelte es sich um „klassische“ PR- Proteine, Endochitinasen, Peroxidase und weitere. Auffallig war weiterhin die an der Ethylen- Biosynthese beteiligte Methionin-Synthase. Das angesprochene Phytohormon spielt eine entscheidende Rolle in Stressreaktionen; seine deutlich erhohte Biosynthese in MMP-RNAi- Pflanzen konnte bereits nachgewiesen werden. Die Ergebnisse dieser Arbeit lassen den Schluss zu, dass es sich bei Matrix Metalloproteinasen in Tomaten um entscheidende Faktoren bei der Reaktion auf Pathogene sowie der Organisation des Apoplasten handelt. Neben dem Phanotyp der RNAi-Pflanzen bieten die hier vorgestellten Ergebnisse proteomischer Analysen hervorragende Ansatzpunkte fur eine nahere Charakterisierung der Proteinfamilie.


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Product Details
  • ISBN-13: 9783869558042
  • Publisher: Na
  • ISBN-10: 3869558040


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